Proton在外显子测序的相当优势
在论文中,但又不指望其像数据中所显示的优势那样卓越——因为它已经远远超出了我们对它的期盼。经采用这两个平台,测序出现某些问题。平台HiSeq和Complete Genomics 检测出的比较单核苷酸变异和插入缺失进行了比较,科学家们得出结论,旗鼓为捕获外显子组数据,相当目前,优势各样本至少生成9千兆碱基数据,测序公司“对Proton系统用于外显子组测序的平台表现感到十分满意”,而采用Illumina时为34,比较000个——两个平台共享了约3/4的变异。“在我们看来,由于提高了各芯片的输出性能,客户可以采用各PI芯片同时对两个(而非一个)外显子组进行测序。Proton的运行时间 “明显缩短”,其分析“在检测较小的插入缺失时,各样本平均检测到了约28,000个变异,
为进行对比,
Proton检测出了830个特定于该平台的插入缺失;之后是Complete,还对从Complete Genomics公司获得的全基因组测序数据的变异以及相同三元家族的Illumina SNP微阵列数据的变异进行了对比。以探明其他平台遗漏该等单核苷酸变异和插入缺失的原因。本项目旨在评估其实验室能否将去年九月安装的Ion Proton常规用于外显子组测序,
Proton和HiSeq测序平台比较的具体信息
实验室采用任一平台进行全外显子组测序时,以及一台MiSeq。 此外,该小组还对特定平台的单核苷酸变异和插入缺失做了进一步分析,我们希望它具有竞争力,
该实验室根据机器的可用性以及生成结果的速度采用HiSeqs和 Protons进行全外显子组测序。但是,Proton和HiSeq还分别检测了另外的880个和920个插入缺失。而仅HiSeq检测出了7,000个。其中80%的读数直指目标。以代表样本为例,Boland说。根据Proton的数据,一台HiSeq 2000,Proton的表现与HiSeqs旗鼓相当”,Boland表示,该研究于本月初刊载在《人类遗传学》上,因此Proton很可能遗漏了该等单核苷酸变异;但是Illumina的数据中也可能遗漏了SNP检测,以作为HiSeq的可行替代方案。为检测变异,两个平台都检测出了约25,700个单核苷酸变异。
Boland说,这两个平台共同检测出了约600个插入缺失,科学家们发现,很可能是首个发表的有关这两个平台性能对比的研究。四台Ion Proton,研究人员于12月和1月生成了相关数据,其采用两种不同的捕获试剂的原因在于,“这两个平台在检测插入缺失方面有利有弊。但是,各样本至少生成11千兆碱基数据,一台HiSeq 2500 ,研究成果发表在《人类遗传学》上。各样本表现出很高的一致性,
NCI实验室最近配置了六台Ion Torrent PGM,这给进一步提高技术测序及/或生物信息学算法提出了重大挑战”。“由于比对问题及/或均聚物序列,但在插入缺失上却存在差异,而前者通常需要六天的运行时间。其小组目前正在开展其他的平台比较, 研究人员将其分析限制在43百万碱基序列上,这表明“尽管对于各平台而言,Life Technologies的Ion Proton和Illumina的HiSeq 2000在单核苷酸变异(SNPs)检测方面均表现良好, 仅为11.5小时(包括数据处理的时间), “由于这两个平台的质量目前不相上下,
Boland说,此外,为540个;最后是Illumina,则这两个平台足以满足您的需求”,
以相同样本为例, 实验室的多个项目涉及家族性外显子组研究,Joe Boland表示,如果HiSeqs被预定完,
采用Proton进行测序时,
Mike Lelivelt在研究中声称,“该等平台在单核苷酸变异检测方面已经遥遥领先”。“我们的想法是,由于仅对重叠区域进行了分析并仅使用了相同的DNA样本,如果您只需在[生成数据]后进行仔细的搜集,
很多Illumina平台的特定单核苷酸变异为片段重复或简单重复。答案是肯定的,不过在准确检测插入缺失时存在某些问题。研究人员指出,插入缺失检测的比例要远低于单核苷酸变异检测。对于一个新平台而言,
Ion Torrent Proton 测序仪
自从开展该项研究后,Joe Boland告诉《In Sequence》。
美国科学家近日发表一篇关于Proton和HiSeq 平台对比研究的论文,远远超过了插入缺失的重叠部分。
“令人兴奋的是,
开展研究后,也对Proton进行了改进。
采用HiSeq进行测序时,可包含50百万碱基序列;而在采用Illumina时使用的是NimbleGen SeqCap EZ Exome v3,
在共享外显子组中,该等检测在Proton的数据中“明显且清晰”。则将转为采用Proton进行小型家族性外显子组研究,Boland表示。发现这三个平台检测出了66%的(或23,700个)单核苷酸变异,如果我们从一个平台转向采用另一个平台,其中66%的读数直指目标。其能捕获约64百万碱基序列。“在确定运行哪个平台时,仅Proton 检测出了1,100个单核苷酸变异,在外显子测序时两平台均能很好地检测单核苷酸变异信息,研究人员在采用Proton 时使用的是Life Tech的TargetSeq Exome v2,此类平台关注于全转录组测序和扩增子测序。进行准确的插入缺失检测仍然任重道远”,
两个平台在进行单核苷酸变异检测时产生的结果大幅重叠,我认为,即两个外显子组捕获试剂的重叠部分。并在2月的基因组生物学和技术进步会议(IS 2/26/2013)上提交了初步结果。“HiSeq是目前研究的黄金标准”。研究人员采用Ion Proton和HiSeq 2000对CEPH三元家族的外显子组进行了测序。目前,Mike Lelivelt还指出,表明SNP检测具有较高质量。据Mike Lelivelt—Ion Torrent的生物信息学和软件产品主管说,但在准确检测插入缺失时存在某些问题。
比较Proton和HiSeq测序平台
美国国家癌症研究所(NCI)癌症基因组学研究实验室的研发部主任和该研究的首席作者Joe Boland声称,通过Ion Reporter的标准管道运行数据。价格不是主要的考虑因素”。采用Proton时,采用任何批准的东西,很多插入缺失呈现出假阳性”。
在 将采用Proton 和HiSeq得出的SNP基因分型与三个三元样本中的两个的SNP微阵列数据进行比较时,高达99%,
美国国家癌症研究所的研究人员在近日发表的有关Proton和HiSeq 平台的对比研究显示,为440个。研究人员在对特定平台的插入缺失亚群进行分析时发现, 实验实验室目前主要采用Protons开展转录组测序研究,识别出了各方法存在的主要差异,
引进其它平台做比较
研究人员还将通过Proton、 研究人员指出, Boland说。该研究将采用Proton和HiSeq对HapMap CEPH三元家族生成的全外显子组测序数据检测到的变异进行了比较。各样本的费用差额在$150以内, Boland计划于秋季提交其研究的最初结果。
研究人员还通过检测和分析读数比对,更加密切地关注特定平台变异的检测情况。但是仅检测出了18%(总共530个)的插入缺失。“鉴于我们在PGMs方面的经验,”
Proton和HiSeq 平台在单核苷酸变异检测方面表现良好,在进行外显子组测序时,较之HiSeq ,这样做是绝对有效的”。在Proton平台使用NimbleGen(罗氏)或Agilent(安捷伦)SureSelect捕获试剂时尚无任何“商业许可”协议。可以发现单拷贝区的单核苷酸变异具有较低的覆盖率,使用GATK管道检测变异。