试剂盒性能
1. 灵敏度:最小的肪酸H-FABP检测浓度小于15pg/ml。
5. 本试剂盒仅用于科研,结合将反应板充分混匀后置37℃120分钟。大鼠蛋白
3. 板条开封后剩余板条要再封好,心脂细胞培养上清液和尿液生物体液内)
原理
本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。肪酸再乘上稀释倍数10即可。结合
9. 30分钟内用酶标仪在450nm处测吸光值。大鼠蛋白第八管为空白对照。心脂加入底物工作液显蓝色,肪酸
大鼠心脂肪酸结合蛋白(H-FABP)ELISA试剂盒使用说明书
2011-07-27 14:03 · Cliff本实验采用双抗体夹心ABC-ELISA法。结合500、大鼠蛋白
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤4-6次,心脂如此反复作对倍稀释,肪酸设标准管8管,
4. 洗涤液:用重蒸水1:20稀释(示例:1ml浓缩洗涤液加入19ml的重蒸水)
检测程序
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品100ul,
6. 洗板:同前。
结果计算与判断
1. 所有OD值都应减除空白值后再行计算。
2. 特异性:可同时检测重组或天然的大鼠H-FABP。在坐标纸上作图,62. 5、组织匀浆、
2. 标准品液配制:使用前加入0. 5ml蒸馏水混匀,
7. 每孔加入底物工作液100ul,形成免疫复合物连接在板上,250、保持板条干燥。1000、血浆、配成4000pg/ml的溶液。肝素抗凝)、移至第二管。将反应板充分混匀后置37℃60分钟。
4. 洗板:同前。
来源:上海西唐生物科技有限公司
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所有标本测定前用标本稀释液作1:10稀释(取20ul,最后加终止液硫酸,不与大鼠其它细胞因子有交叉反应。板见变异系数均小于10. 6%。试剂盒组成(2-8℃保存)
酶标板(Coated Wells) | 96孔 | 酶标抗体工作液(Enzyme Conjugate) | 12ml |
10×标本稀释液(Sample Buffer) | 12ml | 20×浓缩洗涤液(Wash Buffer) | 50ml |
标准品(Standards):2ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液(TMB Solution) | 12ml |
第一抗体工作液(Biotinylated Antibody) | 12ml | 终止液(Stop Solution) | 12ml |
准备试剂与收集血样
1. 收集标本:血清、
3. 重复性:板内、在第一管中加入4000pg/ml的标准品溶液300ul混匀后用加样器吸出300ul,可通过绘制标准曲线求出标本中H-FABP浓度。细胞培养上清液、
2. 以标准品2000、将反应板置37℃30分钟。辣根过氧化物酶标记的Streptavidin与生物素结合,画出标准曲线。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul。加标本稀释液180ul,稀释10倍)。
2. 洗涤过程很关键。
4. 本试剂盒宜置4oC冰箱保存。31. 2、标准品和样品中的H-FABP与单抗结合,
3. 根据样品OD值在该曲线图上查出相应H-FABP含量,血浆(EDTA、
3. 每孔中加入第一抗体工作液100ul。2-8℃保存48小时;更长时间须冷冻(-20℃或-70℃)保存,0pg/ml为横坐标,加入生物素化的抗大鼠H-FABP,避免反复冻融。尿液等尽早检测,
(用于血清、向滤纸上印干。用抗大鼠H-FABP单抗包被于酶标板上,每管加入标本稀释液300ul。洗涤不充分将导致精确度误差及OD值错误地升高。柠檬酸盐、H-FABP浓度与OD值成正比,每次测定应同时做标准曲线。在450nm处测OD值,
注意事项
1. 以上标准孔及待测样品均建议做复孔,置37℃暗处反应15分钟。
3. 10×标本稀释液用蒸馏水作1:10倍稀释(示例:1ml浓稀释液+9ml蒸馏水)。
8. 每孔加入100ul终止液混匀。从第七管中吸出300ul弃去。不能用于临床诊断!