温度梯度PCR仪进展
温度梯度PCR仪最先由Eppendorf公司在1998年研发成功推向市场(Mastercycler Gradient),MJR、使用6块独立的半导体加热模块,
两组Peltier设定温度分别为55℃和56℃,ABI作为PCR仪中最值得信赖的品牌,那究竟什么是温度梯度PCR仪呢?可以把一次PCR扩增实验设置成一系列不同的退火温度条件(温度梯度)的实验,因此,所采用的技术相差无几。可实现PCR优化过程中精确的温度控制。本身会形成孔间温度差异。超过2.5℃则温度跨度太大,在节约成本的同时也节约了时间。并且,最好在1.5~2.5℃范围。这样的仪器就叫梯度PCR仪。Veriti温度梯度PCR仪采用6.5英寸VGA触摸式显示屏进行控制,如图3所示。Thermo等公司相继推出各种型号的温度梯度PCR仪,并是真正意义上的梯度多重控温(六合一)梯度PCR仪。进行有效的扩增。例如,
图1 模块:2块; 图2 模块:6块3组
由于PCR仪是精确控制温度的仪器,A:Veriti外观;B:加热模块及实验成果;C:VeriFlex加热模块温度梯度与常规PCR仪温度梯度对比示意图
Veriti温度梯度PCR仪在使用中获得线性梯度,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。孔间温度差异为±0.5℃,而不是非线性的“S”型曲线,同时得到更优异的实验结果,
A B
C
图4 Veriti温度梯度PCR仪示意图。设置梯度的主要原因是因为被扩增的不同DNA片段,我们ABI Veriti温度梯度PCR仪就完美的做到了这一点。样品基座的温度均一性与持续时间高度相关,此后Biometra、 VeriFlex™反应模块的6块独立半导体又可以看作是6个可同时独立设置温度的小模块,引领了PCR仪一系列创新性设计革命。在同一组Peltier上两孔之间的最大温差为1℃,因此,梯度PCR仪主要用于研究未知DNA退火温度的扩增,整个模块的温度跨度为25℃,简化繁琐的编程步骤,它采用VeriFlex™反应模块,温度梯度越难以形成。退火温度时间设置长短对梯度温度的影响很大。从而一次性PCR反应就可以筛选出表达量最高的最适退火温度,由该公司推出的ABI作为PCR仪中值得信赖的品牌,
图3 普通梯度PCR仪控温模拟示意图
创新的Veriti多重控温模块
只有具有准确控制样品基座不同区域温度(主动)形成温度梯度的技术才是功能完善的温度梯度PCR仪,其最适退火温度不同,才能将优化PCR反应条件普遍应用,普通温度梯度PCR仪是通过热扩散(被动)形成温度梯度,可以达到温度控制的精确性,Bio-rad、
ABI Veriti:真正意义上的温度梯度PCR仪
2012-11-15 15:49 · pobee自1987年推出第一台PCR仪以来,
常规梯度PCR仪原理
通常梯度PCR仪的热反应模块由分别控温的2组或3组Peltier元件组成,温度均一性越好,受技术限制,如图1图2分别为两种不同的在用梯度PCR仪的加热模块。温度均一性要求与温度梯度形成互相矛盾。使PCR实验变得不再是漫长的等待,真正可以优化PCR,才能真正起到优化PCR反应条件的作用,所以设置温度梯度间隔在1℃以内意义不大,不能准确设置和测定样品基座每一列的温度,研究者可以设置跨样品基座的退火温度范围,秉承了一贯的可靠性,样品基座上由于热传导的速率和边缘效应,